α－地 中 海 貧 血 主 要 由 位 于１６號 染 色 體１６ｐ１３．３ 位點的珠蛋白 基 因 缺 失、點 突 變，引起相應珠蛋白鏈 的合成受到抑制或功能喪失所致。α－珠蛋白基因突變 大 多 數 為 大 片 段 缺 失 引 起，同 時 包 含 少 量 的 點 突 變。

１ 資料與方法

１．１ 一般資料

先證者，孕２３周胎兒，其父母均為梧 州市藤縣人。先證者父母于２０１２年在某縣醫院進行 婚前 檢 查，血細胞檢查均顯示為小細胞低色素性貧 血，Ｈｂ分析 顯 示 血 紅 蛋 白 Ａ２（ＨｂＡ２）正 常 和 偏 低。 母親地中海貧血基因檢測未見異常；父親檢出東南亞 缺失型α－地中 海 貧 血 雜 合 突 變。臨 床 醫 生 懷 疑 胎 兒 母親為缺鐵性貧血患者，補鐵后未見平均紅細胞體積 （ＭＣＶ）、平均紅細胞血紅蛋白含量（ＭＣＨ）等指標升 高，該女性于２０１４年曾產下健康一子，此次懷孕為第 二次懷孕，在孕２３周 進 行 Ｂ 超檢查時發現胎兒心胸 比值增大、胎盤 增 厚 等 癥 狀，遂轉診來本院接受進一 步醫學檢查。醫 生 建 議 采 用 羊 水 穿 刺 進 行 產 前 診 斷 分析，并對胎兒父母及其兄長進行地中海貧血篩查及 基因檢測家系分析。

１．２ 儀器與試劑

α－缺失型地中海貧血基因檢測試 劑盒為深圳益生堂生物企業有限公司產品。微 量 樣 品基 因 組 ＤＮＡ 提取試劑盒為北京天根有限公司產 品。β－地中海貧血及α－非缺失型地中海貧血基因檢測 試劑盒為亞 能 生 物 技 術（深 圳）有 限 公 司 產 品。ＰＣＲ 擴增使用 Ｈｅｍａ９６００ＰＣＲ擴增儀，凝膠成像使用黑馬 ＧＳＧ－２０００凝膠成像 系 統，分子雜交使用精宏恒溫水 浴搖床。ＳｙｓｍｅｘＸＮ－１０００全自動血液分析儀為日本 Ｓｙｓｍｅｘ公司產品，Ｂｉｏ－ＲａｄＶＡＲＩＡＮＴＴＭ Ⅱ Ｈｂ分 析系統為美 國 Ｂｉｏ－Ｒａｄ公 司 產 品，Ｌａｂ－Ａｉｄ核 酸 提 取 儀為廈門致善生物科技股份有限公司產品。

１．３ 方法

１．３．１ 血 細 胞 檢 查

采 用 ＳｙｓｍｅｘＸＮ－１０００全 自 動 血液分析儀 進 行 血 常 規 檢 測，ＭＣＶ＜８２ｆＬ、ＭＣＨ＜２７ｐｇ作為地中海貧血初篩標準。

１．３．２ Ｈｂ組 分 分 析

采 用 Ｂｉｏ－ＲａｄＶＡＲＩＡＮＴＴＭ Ⅱ Ｈｂ分析系統進行 Ｈｂ組分分析，ＨｂＡ２＞３．５％或 （和）血紅蛋白 Ｆ（ＨｂＦ）＞２．６％作為β－地中海貧血篩 查標準。

１．３．３ 地中海貧血基因檢測

（１）外周血 ＤＮＡ 提取， 采用 Ｌａｂ－Ａｉｄ核酸提 取 儀 進 行 外 周 血 ＤＮＡ 的 提 取。
（２）羊水 ＤＮＡ 提 取，羊 水 穿 刺 取 兩 份 羊 水 標 本，１份 羊水標本用于細胞培養，培養７ｄ后用其細胞做平行 管基因分析，兩次結果一致方能發出報告。另１份羊 水標本以４０００ｒ／ｍｉｎ離心１０ｍｉｎ，去上清液保留沉 淀物（羊水細胞）轉 移 至１．５ ｍＬ 離 心 管 中，采 用 微 量 樣品基因組 ＤＮＡ 提取試劑盒（離心柱型）提取 ＤＮＡ， 離心管中加入細胞裂解液及蛋白酶 Ｋ 消化，轉移裂解 液至吸 附 柱，洗 脫 ＤＮＡ。
（３）ＤＮＡ 擴 增：采 用 Ｇａｐ－ ＰＣＲ 法 檢 測 α－缺 失 型 地 中 海 貧 血－－ＳＥＡ／、－－ＴＨＡＩ／、－ α３．７／、－α４．２／４種缺失型。α－缺失型擴增程序為９６ ℃，５ ｍｉｎ；９８℃，４５ｓ，６５℃，９０ｓ，７２℃，３ｍｉｎ，１０個循環； ９８ ℃，３０ｓ，６５ ℃，４５ｓ，７２ ℃，３ ｍｉｎ，２５ 個 循 環；７２ ℃，１０ｍｉｎ。采用 ＰＣＲ－反向點雜交法檢測 ＣＤ４１－４２、 ＩＶＳ－Ⅱ－６５４、－２８、ＣＤ７１－７２、ＣＤ１７、βＥ、ＣＤ４３、－２９、 ＣＤ３１、－３２、ＩＶＳ－Ⅰ－Ⅰ、ＣＤ２７／２８、－３０、ＣＤ１４－１５、ＣＡＰ、 Ｉｎｔ、ＩＶＳ－Ⅰ－５１７種 β－地 中 海 貧 血 位 點 突 變 和 αＱＳα、 αＣＳα、αＷＳα３種α－非缺失型地中海貧 血 突 變。β－地 中 海貧血及α－非缺失型地中海貧血點突變擴增程序 為 ５０℃，１５ｍｉｎ，９５℃，１０ｍｉｎ；９４℃，６０ｓ，５５℃，３０ｓ， ７２ ℃，３０ｓ，３５ 個 循 環；７２ ℃，５ ｍｉｎ。
（４）電 泳 與 雜 交：α－缺失型地中海貧血檢測取 ２μＬ 擴 增 產 物，用 １．０％瓊脂糖凝膠（內加核酸染料）在５ｖ／ｃｍ 電壓下電 泳６０ｍｉｎ，在黑馬凝膠成像系統上觀察結果。β－地中 海貧血及α－非缺失型地中海貧血點突變檢測，使用恒 溫水浴搖床于４２ ℃雜交１．５～４．０ｈ。洗膜，顯色后觀 察結果。

１．４ 統 計 學 處 理

采 用 Ｅｘｃｅｌ２００７軟 件、ＡｕｔｏＣＡＤ 繪圖工具分別進行數據、圖像處理。

２ 結　　果

夫妻雙方的血液學結果均為小細胞 低色素貧血。Ｈｂ分析結果正常或偏低。見表１。

先 證 者 α－地中海貧血基因檢測 出－－ＳＥＡ／－－ＴＨＡＩ雙重雜合突變，β－地中海貧血基因１７種 位點突變檢 測 未 見 異 常。先 證 者 母 親α－地 中 海 貧 血 基因檢測出－－ＴＨＡＩ／αα雜合突變，β－地中海貧血基因１７ 種位點突變 檢 測 未 見 異 常。先 證 者 父 親 α－地 中 海 貧 血基因檢 測 出－－ＳＥＡ／αα雜 合 突 變，β－地中海貧血基因 １７種位點突變檢測未見異常。先證者兄長α－地中海 貧血基因檢測未見異常，β－地中海貧血基因１７種位點 突變檢測未見異常。

３ 討　　論 　　

泰國缺失型α－地中海貧血屬于罕見型缺失型地 中海貧血，為α－珠蛋白基因簇大片段缺失，且 斷 裂 點 及缺失區域明確，缺失范圍為ｃｈｒ１６：１９９８００－２３３３００， 包括ζ、α１、α２ 基 因 在 內 的 ３３５０１ 個 堿 基。采 用 Ｇａｐ－ＰＣＲ 分析技術可以檢測東南亞型缺失（－－ＳＥＡ／）、 泰國型 缺 失（－－ＴＨＡＩ／）、右 側 缺 失（－α３．７／）、左 側 缺 失（－ α４．２／）４種α－地中海貧血基因缺失型。